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Número mais provável

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O método do Número mais provável (NMP) (Most provável number - MPN - em inglês), também conhecido como o método dos zeros de Poisson, é uma forma de obter dados cuantitativos em concentrações de elementos discretos a partir de dados de incidencia positiva/negativa. É uma estratégia eficiente para estimar densidades de população que se emprega quando uma avaliação cuantitativa de elementos individuais não é factible.

Conteúdo

Descrição

O método baseia-se em determinar a presença ou ausência (positivo ou negativo) de atributos específicos de microorganismos em cópias obtidas por diluciones consecutivas a partir de mostras de solo ou outros ambientes. Baseia-se no princípio de que uma única célula viva pode se desenvolver e produzir um cultivo turbio. O método requer a realização de uma série de diluciones em série da mostra de cultivo, em um médio líquido adequado para o crescimento de dito organismo de um volume dez vezes maior. Depois, se incuban as mostras desses canos e, passado um tempo, examinam-se os canos. Aqueles canos que receberam uma ou mais células microbianas procedentes da mostra, pôr-se-ão turbios, enquanto os canos que não receberam nenhuma célula permanecerão transparentes.

Ao aumentar o factor de dilución, atinge-se um ponto no que alguns canos conterão tão só um microorganismo e outros canos não conterão nenhum. Ao calcular a probabilidade de que os canos não tenham recebido nenhuma célula, se pode estimar o numero mais provável de microorganismos presentes na mostra original, a partir de uma tabela estatística.[1]

A precisão do método do número mais provável aumenta com o número de canos que se usam; cinco canos por dilución considera-se como uma relação adequada entre precisão e economia.

Uma condição do método é a necessidade de poder reconhecer um atributo específico da população no médio de crescimento que se empregue. A estimativa da densidade populacional obtém-se do padrão de ocorrência desse atributo em sucessivas diluciones em série e o emprego do cálculo probabililístico.[2]

Há muitas entidades discretas que são fáceis de detectar mas difíceis de contar. Uma aplicação é o de qualquer classe de reacção de amplificación ou reacção de catálisis que impede uma cuantificación fácil, mas permite que sua presença seja detectada de modo muito sensível. Alguns exemplos comuns são: crescimento de microoganismos , acção enzimática, ou catálisis química. O método do NMP supõe tomar a dissolução original ou mostra e subdividirla em um factor (frequentemente 10 vezes,ou 2 vezes) e avaliar a presença/ausência em múltiplas subdivisiones.

O grau de dilución para o qual começa a aparecer a ausência indica que os elementos se têm diluido tanto que há muitas submuestras nas que não aparece. Um jogo de repetições para qualquer concentração dada permite uma resolução mais fina, para usar o número de mostras positivas e negativas que estimam a concentração original dentro da apropriada ordem de magnitude.

Aplicações

Este método usa-se para contar microorganismos difíceis de cultivar em médio sólido,ou para determinar o número de células que podem crescer em um médio líquido determinado, como a análise para determinar a contaminação da água potable, determinando o número de bactérias Escherichia coli que podem crescer em um médio com lactosa. A presença de E. coli na água potable é uma prova de contaminação.

Em microbiología , o método emprega-se habitualmente realizando diluciones em série de um cultivo de bactérias em um médio de crescimento, e depois divisões adicionais em série até obter partes alíquotas. Os cultivos são incubados e avaliados a olho, eludindo a tediosa contagem de colónias, ou o caro e tediosa contagem microscópico.

Em biologia molecular, uma aplicação habitual dá-se nos modelos de DNA diluidas para a reacção em corrente da polimerasa (PCR).

As reacções só se dão se um modelo está presente, permitindo uma forma de PCR cuantitativa, para assim avaliar a concentração original das moléculas do modelo. Outra aplicação consiste em diluir os depósitos de enzima na dissolução que contém um sustrato cromogénico, ou diluir antígenos em dissoluções para ensaios ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) ou alguma outra reacção de detecção em cascata de anticuerpos, para medir a concentração original de enzima ou de antígeno.

A principal debilidade dos métodos do número mais provável é a necessidade de um grande número de cópias duplicadas com a dilución adequada para estreitar os intervalos de confiança. No entanto, é um método muito importante para contagem quando a ordem de magnitude é desconhecido a priori e o muestreo é necessariamente destructivo.

Veja-se também

Enlaces externos

Referências

  1. O método do número mais provável. Depto. de Microbiología. Universsidad de Salamanca Inclui as tabelas do NMP.
  2. ENUMERACIÓN BACTERIANA: O NÚMERO MAIS PROVÁVEL Francisco Fontes e Arturo Massol-Deyá. MANUAL DE LABORATÓRIO. ECOLOGÍA DE MICROORGANISMOS. Universidade de Porto Rico, 2002
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